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目的 探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤(LIRI)过程中干扰素调节因子-1(IRF-1)对焦亡的影响.方法(1)24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组与缺血再灌注(IR)2 h、6 h和12 h组,每组6只.Sham组不进行IR处理,其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管(门静脉、动脉与胆道)60 min后分别再灌注2、6、12 h建立LIRI模型.全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况;TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况;Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D(GSDMD)蛋白水平;透射电镜检测肝组织细胞形态变化.(2)将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组(NC+IR组).Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平;透射电镜检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞焦亡情况;酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果(1)体内实验结果显示,与Sham组比较,IR6 h组和12 h组血清ALT、AST

作者:刘钰;王朝阳;李世朋;胡莎莎;杨爽;蔡金贞;张国梁

来源:天津医药 2021 年 49卷 5期

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刘钰;王朝阳;李世朋;胡莎莎;杨爽;蔡金贞;张国梁
来源:
天津医药 2021 年 49卷 5期
标签:
再灌注损伤 肝 干扰素调节因子1 RNA,小分子干扰 细胞焦亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 白细胞介素1β gasdermin D
目的 探讨小鼠肝脏缺血再灌注损伤(LIRI)过程中干扰素调节因子-1(IRF-1)对焦亡的影响.方法(1)24只C57BL/6正常雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术(Sham)组与缺血再灌注(IR)2 h、6 h和12 h组,每组6只.Sham组不进行IR处理,其他3组采用血管夹夹闭肝中叶、左叶脉管(门静脉、动脉与胆道)60 min后分别再灌注2、6、12 h建立LIRI模型.全自动生化仪检测各组血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)水平;HE染色观察肝脏病理改变;免疫组织化学染色检测IRF-1表达情况;TUNEL染色检测肝脏细胞凋亡和焦亡情况;Western blot检测IRF-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Cleaved-Caspase-1及gasdermin D(GSDMD)蛋白水平;透射电镜检测肝组织细胞形态变化.(2)将小鼠正常肝脏AML12细胞分别进行过表达和沉默IRF-1表达后进行模拟IR处理,分为过表达IRF-1+IR组、空载体+IR组、IRF-1 siRNA+IR组及其对照组(NC+IR组).Western blot检测4组细胞IRF-1、Caspase-1、Cleaved-Caspase-1和GSDMD蛋白水平;透射电镜检测细胞形态变化;流式细胞术检测细胞焦亡情况;酶标仪检测细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)释放量.结果(1)体内实验结果显示,与Sham组比较,IR6 h组和12 h组血清ALT、AST