目的:利用有血清和多聚赖氨酸培养液中加入SD 14d胚胎大鼠纹状体区神经干细胞,探讨其分离、纯化神经干细胞操作技术的改进.方法:实验于2003-03/2004-11在广州第一军医大学珠江manbet官网登录
神经外科实验室完成.①选用SD大鼠20只,取孕13～14 d的SD大鼠胚胎纹状体,吸管吹打(不超过10次)后,用组织剪剪成1 mm3块状,以1.25 mL/L的胰酶,在37℃下消化20 min,以S-Dulbecco改良的Eagle培养基-F12中止消化,采用1 000 r/min离心10 min,显微镜下细胞记数,以1×104/cm2接种到改良的有血清和多聚赖氨酸铺被的12孔培养板上,培养液为Dulbecco改良的Eagle培养基-F12加上B27,加入血清和20μg/L表皮生长因子.7d后用吸管吸取漂浮的细胞球,机械吹打成单细胞悬液,按每培养孔1×104/cm2细胞行传代再培养,此后5～7d再传代,方法同前.②利用神经干细胞与星形胶质细胞、神经细胞以及成纤维细胞贴壁之间的差异,使细胞分为贴壁和漂浮的两层细胞,分离去掉贴壁的神经细胞、成纤维细胞、星形胶质细胞以及部分的神经干细胞,得到漂浮的细胞球.③机械吹打后制成单细胞悬液,再传代培养,细胞重新增殖成细胞球,应用免疫细胞化学技术特异性抗原巢蛋白检测最初的细胞球、吹打后的单细胞和重新增殖的细胞球巢蛋白抗原的表达和分化后特异性成熟神经细胞抗原的
作者：段发亮；马廉亭；于耀宇
来源：中国临床康复 2005 年 9卷 26期
