目的:建立高分辨率的大鼠脑海马蛋白质组双向电泳技术,初步分析正常与局灶性脑缺血模型大鼠脑海马蛋白质表达的差异,探讨局灶性脑缺血性损伤的病理机制.方法:实验时间为2003-10/2004-07.模型制备及蛋白质的提取在天津中医学院第一附属manbet官网登录 分子生物学实验室完成,双向电泳部分在国家生物医学分析中心完成.Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、局灶性脑缺血模型组,各组又分为6 h、24 h两个时间段.局灶性脑缺血动物模型参照Longa线栓法并加以改进.各组大鼠在规定时间快速断头取脑,提取脑海马蛋白质,进行双向电泳.①第一向固相pH等电聚焦电泳:分别取正常组和模型组的蛋白样品1.2 mg,选用pH 3～10非线性IPG胶条,采用胶内泡胀的方法,样品和再水化液共350μL.设置聚焦参数:30 V,12 h;200 V,1 h;500V,1 h;1 000 V,1 h;5 000 V,1 h;8 000 V,10 h.固相pH等电聚焦电泳后,IPG胶条分别在十二烷基磺酸钠平衡液a/b中平衡1次,15 min/次.②第二向垂直平板SDS-PAGE:将平衡好的胶条转入预先灌制好的130g/L SDS-PAGE胶上,在PROTEIN-Ⅱ(R)XI Cell上进行第二向电泳,参数设置为:恒流20 mA,40 min;30 mA,4 h.考马斯亮篮R-350染色后,扫描至Dell工作站中,Image-Master 2D Elite v3.01软件对2-DE图谱进行蛋白质点匹配率及差异表达分

作者：温景荣；赵晓峰；王舒；石学敏

来源：中国临床康复 2006 年 10卷 14期