目的:构建可稳定表达成纤维细胞生长因子18蛋白的真核表达载体,观察成纤维细胞生长因子18对体外培养的兔骨髓基质干细胞碱性磷酸酶合成的影响.方法:本实验于2002-10/2004-03在解放军第四军医大学全军骨肿瘤研究所及口腔医学院完成.①将pGEM-T-FGF18-3和pSecTag2B表达载体分别用Kpn Ⅰ和NotⅠ酶切后重组pSecTag2B-FGF18质粒;ELISA检测转染后COS-7细胞上清的成纤维细胞生长因子18蛋白,以大于阴性对照A值2.1倍以上为阳性结果.②用细胞上清刺激骨髓基质干细胞,根据含小牛血清的DMEM不同比例稀释转染后COS-7细胞上清分为1:2稀释组、1:4稀释组、1:8稀释组、1:16组、1:32稀释组;对照组:用含体积分数为0.02小牛血清的DMEM培养液按1:2稀释未转染的COS-7细胞上清.③通过酶动力法检测细胞碱性磷酸酶合成情况.结果:①成功构建了pSecTag2B-FGF18真核表达载体.②转染哺乳动物细胞COS-7用夹心ELISA法检测到了成纤维细胞生长因子18蛋白质的稳定表达,原液及1:10稀释度细胞上清A值大于阴性对照A值2.1倍以上(P＜0.01).③用细胞上清刺激骨髓基质干细胞72 h后,1:2稀释组、1:4稀释组、1:8稀释组、1:16组、1:32稀释组骨髓基质干细胞A值较对照组明显增高(P＜0.01),证实了成纤维细胞生长因子18对体外培养的兔骨髓基质干细胞碱性磷
作者：田竞；杨帆；李秀岩；李林；项良碧；祖启明；范清宇
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 21期
