目的:构建人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因共表达腺病毒并观察其在兔骨髓基质干细胞中的表达.方法:实验于2005-03/12在解放军第四军医大学唐都manbet官网登录
全军骨肿瘤研究所完成.①分别克隆人骨形态发生蛋白2及血管内皮生长因子基因,分别依次亚克隆至穿梭载体构建重组穿梭质粒pAdT-B2V并酶切鉴定;后经PmeⅠ酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdBMP-7并酶切鉴定.②PacⅠ酶切线性化后的pAdBMP-7腺病毒质粒转染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdBMP-7,在荧光显微镜下计算表达绿色荧光蛋白细胞个数,测定AdB2V滴度.③将AdBMP-7体外感染兔骨髓基质干细胞后,以荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达及反转录-聚合酶链反应方法鉴定外源基因的表达,以β-肌动蛋白为内参照,未感染细胞为对照.④AdB2V感染兔骨髓基质干细胞后72 h以免疫细胞化学染色方法检测外源基因的表达,以未感染组为对照.结果:①酶切鉴定表明外源基因已插入到pAdTrack-CMV穿梭质粒且腺病毒重组质粒pAdBMP-7构建成功.②经293细胞包装3 d后可观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心法最终获得约3×109 efu/L滴度的重组腺病毒.③体外感染兔骨髓基质干细胞后荧光显微镜观察及反转录-聚合酶链反应证
作者：闫露；罗二平；栗艳；漆家学
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 33期
