目的:观察从脐血中提取的树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表面表型特点及其所激活的细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性.方法:实验于2003-10/2005-12在解放军军事医学院兽医研究所完成.①脐血来源于长春市妇产manbet官网登录
足月顺产的非高危妊娠产妇,要求无急慢性感染及血液系统疾病,产妇及其家属均签署知情同意书.热休克蛋白70由本室制备纯化.人骨肉瘤细胞Saos-2(北京肿瘤研究所,批号222RXB013538).②封闭式采集脐带血,体外分离脐血单个核细胞,调整浓度为1×109 L-1,接种于24孔细胞培养板,每孔均加入100μg/L人重组粒-巨噬细胞集落刺激因子、50μg/L白细胞介素4、10μg/L肿瘤坏死因子α.培养14 d后,鉴定细胞表面CD1a、HLA-DR的百分率.③用含胎牛血清的IMDM培养Saos-2骨肉瘤细胞至对数生长期,胰酶消化后调整细胞数为5×107 L-1.集传20代生长的Saos-2,冻融2次,低渗震荡,离心,上清用盐酸调pH至7.0,过滤后即为肿瘤抗原肽,与热休克蛋白70体外结合.④另取脐血40 mL,分离T淋巴细胞,诱导分化至第4天,加入热休克蛋白70-肿瘤抗原肽100μL,促使T淋巴细胞活化为细胞毒T淋巴细胞.⑤效应细胞(细胞毒T淋巴细胞)与靶细胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑盐法检测细胞毒T淋巴细
作者：王丹辉；徐鹏；魏军剑；刘玉侠；王敏；张新
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 11期
