目的:腺病毒载体是在内耳基因治疗的实验研究中应用最广泛的载体之一,但载体的靶向性不明显.通过重组腺病毒携带报告基因EGFP转染体外培养耳蜗器官,观察各型细胞的转染特性.方法:实验于2004-08/2006-01在美国纽约州立大学布法罗分校听力耳聋研究中心完成.①实验材料:Fisher大鼠来源于布法罗大学的实验动物中心.AdV/EGFP是Buffalo大学Dr.Lee惠赠.②实验方法:选取出生3 d的大鼠分离获取耳蜗组织.使用携带报告基因-EGFP的重组腺病毒(AdV/EGFP),以1×107,1×108,1×109,2×109V P/mL 作用耳蜗,于感染后6,12,24,48 h和3 d,固定组织,观察感染特性.分离出生3 d的大鼠耳蜗Corti器,基底膜分离后,立即进入2 mL滴度为1×109VP/mL,含2mmol/L 的庆大霉素病毒溶液,作用3 h后平铺到胶粒上,加入含2 mmol/L庆大霉素的生长培养基,作用24 h后收获样品.③实验评估:采用TRITC-labeled phaloidin组织化学染色,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP和TRIC在耳蜗细胞中的表达定位.结果:①重组腺病毒可转染离体培养耳蜗组织中的各种类型细胞,外沟细胞感染率最高,其次为齿间细胞.仅有很少部分的毛细胞和螺旋神经元被感染.②在病毒滴度在107～109 VP/mL 的范围内,重组腺病毒感染耳蜗具有剂量依赖性,但大于这个滴度并不会增加感染效率,而且
作者：王苹；杜波；丁大连；杜宝东
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 42期
