背景：最近的研究发现，一些因子在失神经骨骼肌萎缩的过程中发挥关键性作用，其中“feak-headbox”(Foxo)转录因子是调控骨骼肌萎缩最关键的分子。<br>　　目的：探讨RNA干扰技术体外抑制FOXO3a基因表达的效果。<br>　　方法：6孔细胞培养板中培养大鼠成肌细胞系 L6，使用 pEGFP-N1与 siRNA 重组质粒等比例在Lipofectamine2000介导下转染，优化与检测系统的转染效率；将2μg FOXO3a基因siRNA重组质粒转染L6，转染48 h与72 h。<br>　　结果与结论：①pEG FP-N1与siRNA重组质粒转染后48 h，荧光显微镜下可见细胞中有大量明亮的绿色荧光表达，显示系统有较高的转染效率。②实时定量PCR分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a mRNA的抑制率与未转染对照组相比差异均有显著性意义(P <0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，并以FOXO3a-Ⅰ的抑制效果最为明显。③Western印迹灰度分析结果显示，转染后48 h和72 h，干扰序列FOXO3a-Ⅰ、FOXO3a-Ⅱ、FOXO3a-Ⅲ、FOXO3a-Ⅳ对FOXO3a蛋白表达的抑制率与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)，转染72 h与48 h相比，抑制效应更为明显，与mRNA水平的影响一致。结果可见RNA干扰技术在体外能够明显抑制叉

作者：丁洁；梁炳生；达志峰；朱志祥；韦建；贾英伟；冯勇

来源：中国组织工程研究 2013 年 33期