背景:目前环氧化酶2基因沉默在干细胞中的研究还处在初级阶段.目的:构建携带环氧化酶2基因沉默的慢病毒载体,观察其在人骨髓间充质干细胞中的表达,以及其定向分化潜能变化情况.方法:应用重组慢病毒技术构建携带沉默环氧化酶2基因和绿色荧光蛋白的慢病毒载体,并用其转染体外培养第3代的人骨髓间充质干细胞,以无目的基因的慢病毒转染人骨髓间充质干细胞的实验组和未做处理的人骨髓间充质干细胞分别作为阴性对照组和空白组进行对比.转染后7d分别提取各组细胞的总RNA和蛋白检测环氧化酶2表达量.对环氧化酶2基因沉默的人骨髓间充质干细胞和正常人骨髓间充质干细胞定向诱导,观察环氧化酶2基因沉默对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力的影响.结果与结论:慢病毒转染3d后,荧光显微镜下可见人骨髓间充质干细胞发出绿色荧光,阴性对照组转染效率可达90％以上,实验组转染效率达85％以上.RT-PCR和Western blot检测结果显示,环氧化酶2基因在人骨髓间充质干细胞中的基因水平和蛋白水平均得到了明显抑制.环氧化酶2基因转染对人骨髓间充质干细胞成脂、成骨、成软骨能力无明显影响.
作者：赫天；张海宁；项金瑜；刘相萍；邓继红；王英振
来源：中国组织工程研究 2014 年 18卷 14期
