背景：血管性血友病因子A1通过介导随流血小板在受损血管部位的黏附在初始止血中发挥至关重要的作用，但重组A1在原核中多为包涵体表达，不利于纯化及体外的功能研究。
<br> 目的：在大肠杆菌中稳定高效表达可溶性野生型血管性血友病因子A1以及突变型血管性血友病因子G1324S，并研究其生物学功能。
<br> 方法：将血管性血友病因子A1(野生型)、血管性血友病因子G1324S(功能失去型突变体)重组质粒分别转化到感受态细胞DH5α中，筛选提取质粒。将提取的质粒分别转化到大肠杆菌(E.coli)BL21、E.coli M15中，筛选挑单克隆菌于LB培养基，扩大培养。比较溶菌酶破碎法和超声波破碎法两种不同的裂菌方法，使目的蛋白血管性血友病因子A1的可溶性表达，经过Ni柱亲和层析纯化蛋白，用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的血管性血友病因子A1、血管性血友病因子G1324S纯度和免疫学活性；采用流动腔实验系统分析在不同流体剪应力条件下，血小板在两种目的蛋白上的黏附能力。
<br> 结果与结论：每100 mL上清液可分别纯化得到5.77 mg血管性血友病因子A1，6.83 mg血管性血友病因子G1324S纯品，并具有较高的纯度和免疫学活性。流动腔结果显示，对每个剪切应力下铺设不同A1分子的底板进行两两比较，随着流体剪应力从0.
作者：王依璐；刘晓玲；丁孝茹；方颖
来源：中国组织工程研究 2014 年 38期
