背景：LL-37作为唯一存在人体的抗微生物肽，不仅能促内皮细胞增殖，而且具有较强的促进血管生成能力，在组织修复初期的血管生成中起重要作用。<br> 目的：构建过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒，体外转染犬阴道上皮细胞，检测抗菌肽LL37的表达和分泌情况。<br> 方法：PCR法扩增LL37基因片段，构建融合绿色荧光蛋白(EGFP)和LL37的重组腺病毒表达质粒，限制性内切酶酶切和测序法鉴定构建的重组腺病毒表达质粒，采用HEK293包装后反复冻融扩增、纯化过表达LL37的腺病毒，终点稀释法检测腺病毒滴度。体外分离培养犬阴道上皮细胞，转染过表达LL37腺病毒，分别于转染后1，2，3，5和7 d采用荧光显微镜观察细胞转染情况，ELISA法测定细胞培养上清液中LL37的分泌表达情况。<br> 结果与结论：①限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实成功构建了GV314-LL37腺病毒表达载体，包装纯化后腺病毒滴度达到3×109 pfu/mL；②犬阴道上皮细胞可在体外成功分离培养并稳定传代；③过表达LL37腺病毒可高效转染阴道上皮细胞，转染24 h后荧光显微镜下即可见绿色荧光蛋白表达，随时间延长表达逐渐增强，转染72 h时表达最强，转染效率达89
作者：申复进；许学先；周利梅
来源：中国组织工程研究 2016 年 20卷 51期
