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背景:既往对于抑制大鼠体内高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB1)的释放改善脊髓功能的恢复较多,但对于体外培养脊髓星形胶质细胞,抑制HMGB1改善细胞氧糖剥夺/复氧的损伤研究尚少.目的:探讨抑制大鼠脊髓星形胶质细胞HMGB1后减轻细胞氧糖剥夺/复氧的损伤作用.方法:星形胶质细胞从新生SD大鼠脊髓提取,分离,培养鉴定.实验分两部分:第一部分实验,体外培养大鼠脊髓原代星形胶质细胞,对细胞行氧糖剥夺/复氧处理,实验分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧6,12,24 h组.第二部分实验,星形胶质细胞分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧24 h组;特异性RNA干扰组;非特异性RNA干扰组;丙酮酸乙酯组.利用Western blot和ELISA法检测各部分实验各组星形胶质细胞HMGB1的表达和释放量,利用乳酸脱氢酶的漏出率和MTT法检测细胞的损伤和存活率,光镜下观察细胞损伤后细胞形态结构的变化.结果与结论:①脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后,HMGB1蛋白表达及分泌升高(P<0.01),且复氧至24 h时达到最高值(P<0.01);特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组HMGB1的表达量明显降低,提示特异的HMGB1 shRNA和丙酮酸乙酯能有效抑制HMGB1表达;②细胞氧糖剥夺/复氧后,乳酸脱氢酶漏出率均明显增加,细胞存活率降低(P<0.01),复氧至24 h时损

作者:宋君来;李满;孙麟;马迅;吕聪;贺亚军

来源:中国组织工程研究 2018 年 22卷 28期

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作者:
宋君来;李满;孙麟;马迅;吕聪;贺亚军
来源:
中国组织工程研究 2018 年 22卷 28期
标签:
脊髓损伤 星形胶质细胞 HMGB1 细胞损伤 氧糖剥夺/复氧 干扰 丙酮酸乙酯 MTT LDH
背景:既往对于抑制大鼠体内高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB1)的释放改善脊髓功能的恢复较多,但对于体外培养脊髓星形胶质细胞,抑制HMGB1改善细胞氧糖剥夺/复氧的损伤研究尚少.目的:探讨抑制大鼠脊髓星形胶质细胞HMGB1后减轻细胞氧糖剥夺/复氧的损伤作用.方法:星形胶质细胞从新生SD大鼠脊髓提取,分离,培养鉴定.实验分两部分:第一部分实验,体外培养大鼠脊髓原代星形胶质细胞,对细胞行氧糖剥夺/复氧处理,实验分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧6,12,24 h组.第二部分实验,星形胶质细胞分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧24 h组;特异性RNA干扰组;非特异性RNA干扰组;丙酮酸乙酯组.利用Western blot和ELISA法检测各部分实验各组星形胶质细胞HMGB1的表达和释放量,利用乳酸脱氢酶的漏出率和MTT法检测细胞的损伤和存活率,光镜下观察细胞损伤后细胞形态结构的变化.结果与结论:①脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后,HMGB1蛋白表达及分泌升高(P<0.01),且复氧至24 h时达到最高值(P<0.01);特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组HMGB1的表达量明显降低,提示特异的HMGB1 shRNA和丙酮酸乙酯能有效抑制HMGB1表达;②细胞氧糖剥夺/复氧后,乳酸脱氢酶漏出率均明显增加,细胞存活率降低(P<0.01),复氧至24 h时损