目的 探讨靶向双唾液酸神经节苷脂(disialoganglioside,GD2)的嵌合抗原受体(chime-ric antigen receptor,CAR)转染NK-92细胞后(GD2-CAR-NK-92细胞),对GD2+神经母细胞瘤(neu-roblastoma,NB)细胞的靶向治疗作用.方法 利用分子克隆技术从含靶标GD2的质粒上获得GD2-CAR编码序列,通过电泳和测序鉴定后,将GD2-CAR片段克隆到慢病毒载体上,然后用慢病毒对NK-92细胞进行转染,建立GD2-CAR-NK-92细胞.利用流式细胞术和蛋白免疫印迹方法检测目的蛋白在GD2-CAR-NK-92细胞上的表达.利用非放射性细胞毒性方法检测GD2-CAR-NK-92细胞对GD2+的NB细胞的靶向杀伤作用.结果 电泳和测序结果显示GD2-CAR的序列正确,转染NK-92细胞后,GD2-CAR在GD2-CAR-NK-92细胞上的阳性表达率为98.4％.GD2-CAR-NK-92细胞对GD2+的NB细胞株BE(2)-C的杀伤率为37.53％±0.34％,远远高于未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(6.03％±1.71％和6.07％±2.06％),差异有统计学意义(P＜0.001).而GD2-CAR-NK-92对GD2-的NB细胞株SK-N-SH的杀伤率为30.90％±0.25％,与未被基因修饰的NK-92细胞(pCDH-NK-92和亲代NK-92)的杀伤率(33.73％±1.50％和34.77％±2.54％)相似,差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 构建表达靶向GD2-CAR基因的慢病毒载

作者：李斯文；张璐；王珊

来源：中华小儿外科杂志 2018 年 39卷 3期