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目的 研究分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)重组质粒的构建与原核表达.方法 HSP65的开放阅读框经聚合酶链反应(PCR)扩增后,经Nco Ⅰ与Not Ⅰ内切酶依次酶切,连接至酶切后的原核表达载体PET-28a中,然后将重组质粒转入大肠杆菌BL-21中,PCR筛选阳性克隆,并经DNA测序进一步验证.阳性克隆进一步扩大培养,并进行乳糖诱导,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳对菌体蛋白进行检测.结果 成功扩增出1 623 bp的目的片段HSP65;测序结果显示,该片段与目的序列完全相符,重组子PET-28a/HSP65构建成功;乳糖诱导后的HSP65在大肠杆菌中实现高表达.结论 分枝杆菌HSP65蛋白的成功表达,为研究其在抗肿瘤疫苗中的应用奠定了基础.
作者：张青苗；王雯雯；张会勇；张光谋
来源：新乡医学院学报 2016 年 33卷 12期
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