目的 通过研究人脐带间充质干细胞(hucMSCs)培养上清对M1型巨噬细胞的影响,探讨其作用机制.方法 选择小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系(RAW264.7)巨噬细胞,将其种植于6孔板中,待汇合度约70％时进行处理.配制含50％hucMSCs培养上清的高糖DMEM条件培养基(CM).巨噬细胞分成3组,blank组用2 ml高糖DMEM培养基培养24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h,DMEM组用2 ml含200 ng/ml脂多糖(LPS)的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml高糖DMEM培养基培养24 h,CM组用2 ml含200 ng/ml LPS的高糖DMEM培养基刺激24 h后更换2 ml CM培养24 h.收集各组培养上清和巨噬细胞进行后续实验.利用PKH67染色剂进行CM中含细胞膜的成分染色(绿),DAPI染色剂进行巨噬细胞胞核染色(蓝),通过荧光显微镜观察巨噬细胞吞噬hucMSCs-CM中含细胞膜成分的情况.应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和流式细胞多因子分析技术分析促炎因子TNF-α和抗炎因子IL-10表达水平的改变.应用流式细胞术鉴定经处理后巨噬细胞表型.结果 在hucMSCs上清中,荧光显微镜下观察到RAW264.7吞噬CM中膜性成分且数量随时间增加而增加.在巨噬细胞极化实验中,RT-qPCR结果提示CM组抗炎因子IL-10 mRNA相对表达量低于DMEM组,且促炎因子TNF-αmRNA相对表达量低于blank组和DMEM组(P均<0.05).
作者：廖威；张昌林；李田
来源：新医学 2021 年 52卷 2期
