目的探讨以脱水保存角膜基质/后弹力层为载体培养角膜内皮细胞,构建组织工程化角膜内皮细胞移植膜的可行性及其机理.设计实验性研究.研究对象体外培养的兔角膜内皮细胞和脱水保存角膜基质/后弹力层.方法兔角膜经中性蛋白酶37℃孵育5min,去除内皮细胞保留后弹力层和角膜基质,无水氯化钙脱水后低温保存,使用前磷酸盐缓冲液复水.纯化的角膜内皮细胞接种于基质载体的后弹力层上进行体外培养,直至生长融合为细胞单层,倒置显微镜下观察细胞形态学变化.在不同时间点(1、2、4、6d)收集植片进行HE染色和电镜检测,分析组织结构的变化.主要指标角膜内皮细胞在脱水保存角膜基质/后弹力层载体上形成单层时间和生长特性,组织工程化角膜内皮细胞移植膜的三维结构和超微结构.结果角膜内皮细胞在载体上快速贴壁生长并增殖,体外培养6～7 d即融合成单层,复合角膜内皮组织由基质/后弹力层和单层扁平内皮细胞组成,与生理状态下的角膜内皮组织相近.电镜下组织培养的兔角膜内皮细胞间连接紧密,细胞为多边形,胞核清晰,具有正常兔角膜内皮细胞的超微结构.结论角膜内皮细胞能够在干燥脱水保存基质/后弹力层载体上良好生长,并形成形态结构与正常角膜内皮组织相似的细胞单层,为角膜内皮细胞移植提供了新的载体选择.
作者：袁进；周文天；周辉；周世有；顾建军；陈家祺
来源：眼科 2006 年 15卷 3期
