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目的 通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用.方法 通过RT.PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLR mRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg·L-1、10μg·L-1、100μg·L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10 μg·L-1 LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg·L-1、10×103μg·L-1、100×103μg·L-1)进行干预,并检测TLR mRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达.结果 TLR1-TLR10 mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、YLR6高表达.LPS能增加细胞TLR mRNA的表达,且当LPS为10μg·L-1时,TLR mRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLR mRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加.免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势

作者:秦勤;晋秀明;瞿佳

来源:眼科新进展 2010 年 30卷 7期

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秦勤;晋秀明;瞿佳
来源:
眼科新进展 2010 年 30卷 7期
标签:
Toll样受体 角膜上皮细胞 细菌脂多糖 糖皮质激素 细胞因子
目的 通过研究细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人角膜上皮细胞系(hunman corneal epithelial cell line,HCEC)中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)的表达和功能的影响,以及糖皮质激素对这种影响的调控,探讨TLR及糖皮质激素在角膜细菌感染中的作用.方法 通过RT.PCR及实时PCR检测角膜上皮细胞中TLR mRNA的表达;并在细胞培养液中加入3种浓度LPS(1μg·L-1、10μg·L-1、100μg·L-1)共培养,检测TLR的表达;以及在此基础上,选择在10 μg·L-1 LPS刺激的细胞培养液中分别加入氢化可的松(1×103μg·L-1、10×103μg·L-1、100×103μg·L-1)进行干预,并检测TLR mRNA的表达;再采用酶联免疫吸附实验检测细胞培养液中IL-6、IL-8的释放;并通过免疫荧光组织化学检测TLR蛋白的表达.结果 TLR1-TLR10 mRNA在HCEC中均有表达,且表达量各不相同,其中TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、YLR6高表达.LPS能增加细胞TLR mRNA的表达,且当LPS为10μg·L-1时,TLR mRNA的表达量最高,同时IL-6、IL-8的释放也相应增加.加入氢化可的松干预后,随着激素浓度的增高,HCEC中TLR mRNA的表达也随之增加,此时IL-6的释放减少,IL-8的释放增加.免疫荧光组织化学也显示了3种浓度激素干预下HCEC的TLR2蛋白、TLR4蛋白在胞内均有表达,且强度不同,趋势