目的 构建带有pXJ-40-myc标签的丙酮酸激酶M1(pyruvate kinase M1,PKM1)基因真核表达载体,并初步探讨PKM1对眼黑色素瘤的影响.方法 将传代培养的眼B16黑色素瘤细胞随机分为实验组(转染pXJ-40-myc-PKM1重组质粒)和对照组(转柒pXJ-40-myc空载质粒);以人肝cDNA文库为模板应用PCR扩增出PKM1基因的CDS编码区序列,应用菌液PCR、双酶切鉴定,分别将pXJ-40-myc-PKM1重组质粒和pXJ-40-myc空载质粒瞬时转染眼B16黑色素瘤细胞,Western blot检测其表达,应用划痕实验法检测PKM1对眼B16黑色素瘤细胞转移的影响.结果 PCR技术扩增出长1800 bp的PKM1基因,与预期大小一致;与对照组相比,菌液PCR结果为阳性,双酶切切出的条带分别为4000 bp和1800 bp;与对照组相比,Western blot检测结果为重组质粒pXJ-40-myc-PKM1在眼B16黑色素瘤细胞成功表达.与对照组相比,划痕实验结果为重组质粒pXJ-40-myc-PKM1抑制眼B16黑色素瘤细胞的迁移.结论 成功构建了pXJ-40-myc-PKM1真核表达载体,并证明该基因抑制眼B16黑色素瘤细胞的迁移.
作者：刘园园；朱晓雨；刘莹；徐小洁；李玲；叶棋浓；刘丹
来源：眼科新进展 2018 年 38卷 1期
