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目的 研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响.方法 根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组.对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理24h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L-1 3-MA处理24h,然后更换培养基再加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理24 h.Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3) Ⅱ型和Ⅰ型的比值(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagyrelated gene 3,Atg3)的蛋白表达.ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达.比较三组ARPE-19细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量.然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数.结果 对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.405±0.095、

作者:李蓉;姚杨;杜军辉;姚国敏;王小娣;张进

来源:眼科新进展 2019 年 39卷 8期

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作者:
李蓉;姚杨;杜军辉;姚国敏;王小娣;张进
来源:
眼科新进展 2019 年 39卷 8期
标签:
自噬 血管生成 高糖 血管内皮生长因子 视网膜新生血管 糖尿病视网膜病变 细胞培养
目的 研究高糖条件下诱导的人视网膜色素上皮细胞株(ARPE-19)自噬对其表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),及恒河猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移和管腔形成的影响.方法 根据不同干预将ARPE-19细胞随机分为对照组、高糖组及3-甲基腺嘌呤(3-MA)+高糖组.对照组细胞在无糖DMEM培养基中常规培养24h,高糖组细胞在DMEM培养基中加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理24h,3-MA+高糖组细胞先用10 mmol·L-1 3-MA处理24h,然后更换培养基再加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理24 h.Western blot法检测细胞自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-related protein 1 light chain 3,LC3) Ⅱ型和Ⅰ型的比值(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、Beclin-1及细胞中自噬相关基因3(autophagyrelated gene 3,Atg3)的蛋白表达.ELISA法检测ARPE-19细胞上清液中VEGF的蛋白表达.比较三组ARPE-19细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、Atg3及VEGF的蛋白表达量.然后将以上三组ARPE-19细胞上清液分别加入RF/6A细胞培养基中,将RF/6A细胞也按以上方法分组,分别采用Transwell法及Matrigel胶法检测并比较三组RF/6A细胞迁移数及细胞管腔形成数.结果 对照组、高糖组和3-MA+高糖组ARPE-19细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值分别为0.405±0.095、