目的 研究穿透角膜移植术(PKP)后重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的绿色荧光蛋白(GFP)在大鼠植片中的转染及表达情况.方法 建立32只大鼠穿透角膜移植的动物模型,SD大鼠作为受体,Wistar大鼠作为供体,供体植片置于含1010μg/mL(病毒基因组数/mL)rAAV-GFP的DMEM/F12 1:1混合培养液中培养30min.按照不同的观察时间点用抽签法将角膜移植术后的大鼠随机分成4组,每组8只.手术后隔日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片的存活情况.于角膜移植术后1、2、4、12周取各组眼球在共焦显微镜下观察角膜组织中GFP的表达情况,Infinity-capt软件测量角膜植片内皮层中荧光的表达强度.结果 各组中选取的受体角膜植片无水肿、混浊、新生血管及其他并发症发生.GFP基因表达阳性的角膜内皮细胞呈绿色荧光.各组角膜内皮细胞绿色荧光强度与背景亮度比值,A组:91.83±10.83;B组:128.67±4.32;C组:117.33±3.01;D组:118.50±3.02,转染后1周即有明显表达,4周及12周组较1周组强(P＜0.01),2周组强度最高(P＜0.01).结论 通过共培养的方法,rAAV-GFP能够有效地转染到角膜内皮细胞中.PKP后GFP基因能够持续、高效、稳定地在移植片的角膜内皮细胞中表达.
作者：周炼红；朱祥祥；邢怡桥；陈希
来源：眼科研究 2009 年 27卷 5期
