背景 青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生是滤过泡功能下降的主要原因,羟喜树碱是诱导肿瘤细胞及多种非肿瘤细胞凋亡的药物.目前已有羟喜树碱诱导成纤维细胞凋亡的相关报道,但其作用机制尚不完全清楚. 目的 探讨羟喜树碱是否能诱导HTFs凋亡并研究其作用机制.方法 取离体＜6h的供体结膜囊组织,以组织块培养法原代培养HTFs,用含质量分数10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基继续传代培养,用波形蛋白及角蛋白对培养的细胞进行鉴定,取3～6代细胞进行实验.分别将0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱加入培养基中作用5 min,未加入羟喜树碱的细胞作为对照组,采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测各组细胞的增生能力并进行比较.用0.10 g/L羟喜树碱处理细胞,继续培养24 h,用annexinV/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,用JC-1染色检测HTFs线粒体膜电位,采用Western blot法检测HTFs中半胱氨酸天冬酶-3(caspase-3)、caspase-9及线粒体/细胞质中细胞色素C(cyt C)蛋白的表达,对各组中的测量结果进行比较.结果 0、0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱组的HTFs增生值(A450)分别为0.9716±0.0608、0.8035±0.0346、0.7048±0.0446和0.6265±0.0286,总体差异有统计学意义(F=26.372,P=0.002),0.01、0.05、0.10 g/L羟喜树碱组HTFs A450

作者：殷雪；傅煜轩；袁志兰

来源：中华实验眼科杂志 2013 年 31卷 3期