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目的:比较腺相关病毒(AAV)不同血清型对小鼠视网膜层的趋向性。方法:构建pFastBacDual-inCap衣壳质粒和pFastBacDual-ITR-CMV-EGFP基因组质粒;包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)、rAAV6、rAAV8、rAAV9;以感染复数(MOI)2000的比例感染HEK293T细胞,24 h后观察荧光表达;应用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9组和对照组,每组5只,分别双眼玻璃体腔注射rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9和磷酸盐缓冲液(PBS)各1 μl,注射后2周,制作眼球冰冻切片以及视网膜铺片,分别应用倒置荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜观察rAAV不同血清型增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光强度和感染部位。应用倒置荧光显微镜观察玻璃体腔注射rAAV2后2周、1个月、3个月EGFP荧光强度变化。结果:重组病毒对HEK293T的感染效率从高到低依次为rAAV2、rAAV6、rAAV8和rAAV9,转导效率分别为39.5

作者:李泰明;魏峥;刘晓玫;邵嘉红;袁运;曹金晶;王飞飞;王东鑫;李文生;张春

来源:中华实验眼科杂志 2020 年 38卷 5期

知识库介绍

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作者:
李泰明;魏峥;刘晓玫;邵嘉红;袁运;曹金晶;王飞飞;王东鑫;李文生;张春
来源:
中华实验眼科杂志 2020 年 38卷 5期
标签:
腺相关病毒 基因治疗 玻璃体腔注射 视网膜 视网膜疾病 Adeno-associated viruses Gene therapy Intravitreal injection Retina Retinal diseases
目的:比较腺相关病毒(AAV)不同血清型对小鼠视网膜层的趋向性。方法:构建pFastBacDual-inCap衣壳质粒和pFastBacDual-ITR-CMV-EGFP基因组质粒;包装重组腺相关病毒2型(rAAV2)、rAAV6、rAAV8、rAAV9;以感染复数(MOI)2000的比例感染HEK293T细胞,24 h后观察荧光表达;应用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9组和对照组,每组5只,分别双眼玻璃体腔注射rAAV2、rAAV6、rAAV8、rAAV9和磷酸盐缓冲液(PBS)各1 μl,注射后2周,制作眼球冰冻切片以及视网膜铺片,分别应用倒置荧光显微镜和激光扫描共焦显微镜观察rAAV不同血清型增强型绿色荧光蛋白(EGFP)荧光强度和感染部位。应用倒置荧光显微镜观察玻璃体腔注射rAAV2后2周、1个月、3个月EGFP荧光强度变化。结果:重组病毒对HEK293T的感染效率从高到低依次为rAAV2、rAAV6、rAAV8和rAAV9,转导效率分别为39.5