目的：原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术，为建造心血管疾病相关模型提供了重要的基础保障。文中旨在通过探讨不同消化时间对原代心肌细胞培养的影响，得到一套简便易行并且能获得较高成活率、纯度及活性的原代心肌细胞的培养方法。方法采用单消化酶多次消化心肌组织，根据消化时间分为8 min组和10 min组，差速贴壁法和5-溴-2-脱氧尿苷抑制法获得纯度较高的心肌细胞。光学显微镜下观察心肌细胞形态，记录镜下不同区域心肌细胞搏动频率测定细胞活力。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率，横纹肌肌动蛋白鉴定心肌细胞。最后建立心肌细胞肥大模型，比较实验组（血管紧张素Ⅱ）和对照组[10％FBS DMEM （ H＋）培养基]的细胞截面平均面积。结果与8 min组比较，10 min组原代心肌细胞大部分伸出伪足相互接触交织成网，逐渐形成细胞簇，立体感明显，细胞搏动及收缩更为明显而有力。分离纯化后原代心肌细胞的平均存活率均＞90％，10 min组平均存活率显著高于8 min组[（95．4±0．8）％sv （93．0±0．8）％，P＜0．05]。α-actin免疫细胞化学染色鉴定，8 min组和10 min组原代心肌细胞的阳性率均＞95％。血管紧张素Ⅱ作用48 h后，10 min组原代心肌细胞实验组心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide， AN
作者：屈双丽；杨晓敏
来源：医学研究生学报 2015 年 6期
