目的 Tiam1是一种鸟嘌呤核苷酸转换因子,与肿瘤的侵袭和转移密切相关.文中构建Tiam1基因的截短体原核表达重组质粒,在大肠埃希菌中诱导蛋白表达,并对GST融合蛋白进行纯化和鉴定. 方法 采用PCR方法扩增Tiam1的C685、C751、C1199基因片段,将目的基因片段插入pGEX-4T-1质粒载体后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导蛋白表达.利用谷胱甘肽琼脂糖珠进行分离纯化,再采用Western blot检测目的蛋白表达情况. 结果 构建了3个Tiam1基因的截短体重组质粒,IPTG诱导显示,GST-Tiam1 C685、GST-Tiam1 C751、GST-Tiam1 C1199主要以可溶性蛋白形式在细胞裂解液上清中表达,表达产物的相对分子量分别为100000、108000、157000. 结论 成功构建可以表达生物活性蛋白的GST-Tiam1 C685、GST-Tiam1 C751、GST-Tiam1 C1199融合蛋白原核表达载体,为进一步研究Tiam1蛋白奠定了基础.
作者：黄静；张余琴；陈龙华；丁轶
来源：医学研究生学报 2017 年 30卷 9期
