目的 鉴定血根碱致钉螺肝脏差异表达的基因.方法 浓度梯度法测定血根碱浸杀钉螺的半数致死浓度(LC50);以80％ LC50血根碱浸泡钉螺,分离血根碱组和清水组活钉螺肝脏;提取mRNA,逆转录为cDNA,进行抑制消减杂交;巢式PCR扩增差异cDNA,克隆至pMD-l8T载体,PCR和测序鉴定,NCBI中blastx比对分析表达序列标签(expressed sequencetag,EST).结果 血根碱浸杀钉螺LC50为7.5 mg/L.获得的EST序列大小在150～450 bp,经blastx比对,表达上调的基因有α-4 (Ⅵ)胶原链、α-5 (Ⅵ)胶原链、40 S核糖体蛋白S19、假定蛋白(WP_ 009787 197.1)、kelch样蛋白、颗粒体样蛋白;表达下调的基因有β-微管蛋白、α-淀粉酶1、大亚基核糖体蛋白L23e、几丁质酶-1、捷蛋白-3、假定蛋白(EKC34 262.1)、线粒体乙醛脱氢酶、肽聚糖识别蛋白、真核转录延长因子1A、铁蛋白、去整合素金属蛋白酶、溶菌酶1、1,3(4)-β-葡聚糖酶1、血蓝蛋白α-4D亚基,这些基因编码蛋白的功能涉及物质转运、蛋白合成、增殖诱导、营养、抗氧化、抗炎、呼吸、信号转导等.结论 血根碱处理导致钉螺肝脏基因表达发生改变.
作者：杨双；彭飞；刘年猛；孙慧；杨盛清；袁仕善
来源：中草药 2014 年 45卷 20期
