目的 克隆刺五加香叶基焦磷酸合成酶(geranyl pyrophosphate synthase,GPS)基因的cDNA序列并分析基因序列特征、不同器官中基因表达水平及其与皂苷含量的相关性.方法 提取刺五加的RNA,逆转录为cDNA.根据转录组测序结果中编码GPS的unigene(c37362.graph_c0),设计特异性引物,经过PCR扩增GPS基因的cDNA全长.利用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)分析GPS基因在不同器官中的表达水平,并通过分光光度法检测刺五加总皂苷含量.结果 克隆得到长1 260 bp、编码419个氨基酸的刺五加GPS基因cDNA.GPS蛋白定位于线粒体内且不存在跨膜区域.GPS基因在各个器官中均有表达,在叶片中的表达量最高,是根中表达量的5.26倍.GPS基因的相对表达量与皂苷量呈现出同升同降的变化趋势,表现为显著正相关关系(r=0.851,P＜ 0.05).结论 首次克隆获得刺五加GPS基因的cDNA全长序列,明确了刺五加GPS基因的表达量与皂苷含量之间存在正相关关系.
作者：张佳桢；邢可心；冯文昭；国红玉；王卓；邢朝斌
来源：中草药 2019 年 50卷 5期
