目的构建及表达人cTnI(28-110aa)-linker-TnC融合蛋白.方法应用PCR技术从人心脏cDNA文库中扩增出cTnI(28-110aa)和TnC基因,通过引物设计在两者之间加上 linker序列即编码19个中性氨基酸残基TS-(G4S)3-AC的序列,克隆PCR产物,并构建成pET28a-cTnI(28-110aa)-linker-TnC表达质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3),用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达, NTA树脂亲和层析纯化后检测其纯度和免疫反应性.结果成功构建了cTnI(28-110aa)-linker-TnC融合蛋白的基因,并在大肠杆菌中实现可溶性高表达,在摇瓶中的表达量为20 mg/L,经一步NTA树脂亲和层析纯化,获得条带单一的目的蛋白,采用进口全自动免疫检测系统鉴定证实,目的蛋白有较高的免疫反应性.结论采用原核表达方法获得了具有高纯度和高免疫反应活性的cTnI(28-110aa)-linker-TnC融合蛋白.
作者：洪理泉；郑佐娅；赵卫国
来源：中国微循环 2005 年 9卷 6期
