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目的:通过基因克隆构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体.方法:从人白血病淋巴细胞HL-60株中提RNA,反转录出cDNA,然后以cDNA为模板,通过PCR法扩增目的基因SSA,经纯化、双酶切、DNA浓缩回收,插入到酵母分泌型表达载体pPIC9k,用热冲击法转化感受态细胞DH5α,筛选阳性克隆提取质粒,双酶切鉴定并测序.结果:PCR产物大小符合要求,重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致,测序结果正确.结论:成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体,为今后获取高纯度、高产量的SSA抗原,研制新型抗SSA诊断试剂盒作前期准备.

作者:郑宗富;兰小鹏;杨湘越;苏东辉

来源:中国误诊学杂志 2008 年 8卷 17期

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作者:
郑宗富;兰小鹏;杨湘越;苏东辉
来源:
中国误诊学杂志 2008 年 8卷 17期
标签:
干燥综合征/免疫学 核糖核蛋白类/遗传学/生物合成 转染 毕赤酵母/遗传学 遗传载体
目的:通过基因克隆构建表达人干燥综合征抗原A(SSA)的巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体.方法:从人白血病淋巴细胞HL-60株中提RNA,反转录出cDNA,然后以cDNA为模板,通过PCR法扩增目的基因SSA,经纯化、双酶切、DNA浓缩回收,插入到酵母分泌型表达载体pPIC9k,用热冲击法转化感受态细胞DH5α,筛选阳性克隆提取质粒,双酶切鉴定并测序.结果:PCR产物大小符合要求,重组质粒pPIC9k-SSA双酶切鉴定与预期一致,测序结果正确.结论:成功构建SSA毕赤酵母分泌型表达载体,为今后获取高纯度、高产量的SSA抗原,研制新型抗SSA诊断试剂盒作前期准备.