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目的探讨稳定过表达Smac 基因对胃癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染MKN-45细胞,G418筛选阳性克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内caspase-3表达.结果所获胃癌亚克隆细胞MKN-45/Smac的Smac mRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN-45(P<0.01).10 μg/ml 丝裂霉素作用6~24 h后,与MKN-45细胞比较,MKN-45/Smac细胞生长活性减弱10.0

作者:郑丽端;吴翠环;童强松;汪良;吴人亮

来源:中华病理学杂志 2005 年 34卷 2期

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作者:
郑丽端;吴翠环;童强松;汪良;吴人亮
来源:
中华病理学杂志 2005 年 34卷 2期
标签:
胃肿瘤 caspase类 脱噬作用 肿瘤细胞,培养的
目的探讨稳定过表达Smac 基因对胃癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染MKN-45细胞,G418筛选阳性克隆.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western 印迹鉴定Smac表达,同时以丝裂霉素作为凋亡诱导因子,采用锥虫蓝活细胞拒染法检测癌细胞体外生长活性,透射电镜、吖啶橙-溴化乙啶荧光染色法、末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察癌细胞凋亡及比率;Western印迹、比色法检测细胞内caspase-3表达.结果所获胃癌亚克隆细胞MKN-45/Smac的Smac mRNA、蛋白表达水平均显著高于MKN-45(P<0.01).10 μg/ml 丝裂霉素作用6~24 h后,与MKN-45细胞比较,MKN-45/Smac细胞生长活性减弱10.0