目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞自噬与凋亡中的作用及其机制,明确其对卵巢癌细胞生长及顺铂敏感性的影响.方法 以钙选择性螯合剂——BAPTA-AM、钙离子载体-A23187分别下调、上调卵巢癌细胞系SKOV3细胞中GRP78基因的表达,实验分为3组,BAPTA-AM组:加入BAPTA-AM,终浓度为40 μmol/L,作用时间为1 h;A23187组:加入A23187,终浓度为4μmol/L,作用时间为24 h;空白对照组:未加任何药物,作用24 h.(1)采用逆转录(RT)-PCR技术、蛋白印迹(western blot)法分别检测3组细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA和蛋白的表达;(2)荧光染色法检测3组细胞的自噬情况;(3)流式细胞仪检测3组细胞的凋亡情况;(4)3组细胞经不同浓度(100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0.78 mg/L)顺铂作用后(即为BAPTA-AM+顺铂组、A23187+顺铂组、顺铂组),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定3组细胞对顺铂的敏感性[以50％抑制浓度(IC50)表示].结果 (1)3组SKOV3细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA和蛋白表达的比较:SKOV3细胞中GRP78、beclin1、Bcl-2、CHOP mRNA表达水平,BAPTA-AM组分别为0.583 ±0.025、0.860±0.055、0.714±0.032、0.811 ±0.004,A23187组分别为0.840±0.044、0.654±0.065、0.908±0.0

作者：李敏；田静；瞿全新

来源：中华妇产科杂志 2015 年 50卷 11期