目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对胰岛素样生长因子-Ⅱ (IGF-Ⅱ)基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制. 方法 分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3 mRNA、HBx mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态;进一步分析稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx及其对照细胞株HepG2-control中P3 mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态;最后,将体外甲基化的IGF-Ⅱ基因P3启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P3及携带HBx基因的pCMV-tag2B-X质粒共转染HepG2细胞,采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶试验检测HBx蛋白对P3启动子转录活性和甲基化状态的影响.计数资料采用x2或Fisher精确检验,计量资料采用独立样本t检验或Mann-WhitneyU检验,线性相关分析采用Pearson相关系数评价. 结果 (1) HBV感染阳性的肝癌组织中P3 mRNA表达水平(△CT为-9.59±3.22)明显高于HBV阴性的肝癌组织(△CT为-12.97±3.08),P=0.006;而P3启动子17个CpG位点的平均甲基化水平(36.9％±15.5％)明显低于HBV阴性的肝癌组织(52.1％±19.1％),P=0.025;P3 mRNA丰度与HBx mRNA表达水平呈正相关,而与P3启动子甲基化水平呈负相关.(2)在HepG2-HBx及其对照细胞中,也显示了类似的P3 mRNA表达水平及P3启动子甲基化水平变化

作者：汤绍辉；张少华；张小娟；吴胜兰；李俊峰；江向武；周鸿科；罗羽宏；曹明溶

来源：中华肝脏病杂志 2014 年 22卷 4期