目的 构建由人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的NIS基因以及由早期生长应答因子1(Egr1)启动子调控的人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因的双启动子重组杆状病毒载体,探讨同时靶向肿瘤细胞与血管内皮细胞的基因治疗模式的可行性.方法 将h TERT启动子和NIS基因片段以及Egr1启动子和K5基因片段分别亚克隆至杆状病毒载体,经草地贪夜蛾卵巢细胞(Sf9)包装并扩增得到重组杆状病毒(Bac-h TERT-NIS-Egr 1-K5),同时将CMV启动子调控的重组杆状病毒(Bac-CMV-NIS-Egr1-K5)以及不含NIS基因或不含K5基因的重组杆状病毒(Bac-h TERT-0-Egr 1-K5、Bac-hTERT-NIS-Egr1-0)作为对照组.采用荧光定量PCR及Western blot分析NISmRNA和蛋白在人宫颈癌细胞HeLa中的靶向表达,以及131I辐射对K5 mRNA和蛋白的表达调控.通过摄碘实验、NaClO4抑制实验以及细胞增殖抑制实验验证NIS蛋白的功能及由其介导的131I抑瘤作用.通过细胞凋亡实验评估K5蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促凋亡作用.统计学检验采用方差分析.结果 成功构建重组杆状病毒Bac-hTERT-NIS-Egr1-K5.荧光定量PCR及Western blot显示肿瘤特异性启动子hTERT介导的NIS基因仅在HeLa细胞中有表达,而在正常肺纤维细胞MRC5中无表达.131I可以调控辐射敏感启动子Egr1下游K5基因的转录和翻译.

作者：张敏；郭睿；石朔；苗莹；徐昊平；李彪

来源：中华核医学与分子影像杂志 2014 年 34卷 6期