目的 从吸引疱疱顶微小皮片建立人表皮黑素细胞(MC)原代培养,以人羊膜为支架培养MC,观察羊膜对MC黏附、增殖和树突发育的影响.方法 用负压吸疱法分离疱顶微小皮片,多巴染色后对取自同一个体下腹部和前臂屈侧皮片的MC进行计数.皮片经胰酶消化后自基底面轻刮表皮细胞建立原代MC培养,将培养的第2～4代MC接种至新鲜或冻存羊膜上共孵育不同时间后,倒置显微镜下观察MC形态和树突发育.行石蜡包埋组织切片,HE染色后观察MC对羊膜的黏附.用MTT比色法测定接种在羊膜上的MC存活率.结果 前臂屈侧吸引疱疱顶皮片多巴染色阳性细胞个数为(1543.1±113.3)个/mm2,腹部皮片为(857.4±101.7)个/mm2.在4周内建立MC原代培养至少需要从2个疱顶(面积约25.1 mm2)的前臂皮片获取的表皮细胞.倒置显微镜下观察,与单纯接种细胞培养皿的MC比较,接种至新鲜或冻存羊膜上继续培养4、8、12 d的MC形态多为两极,树突细长延伸.HE染色示MC能黏附并均匀分布在羊膜的基底膜层表面.MTT法测定结果示,羊膜对MC的分裂增殖有抑制,但冻存羊膜与新鲜羊膜对MC增殖抑制差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人前臂屈侧皮肤富含活性MC,是获取吸引疱疱顶微小皮片建立MC原代培养的较好部位.人羊膜支持MC黏附生长和树突发育,有望成为一种能荷载体外培养扩增MC的人源
作者：佘小光；刘小明；雷铁池
来源：中华皮肤科杂志 2011 年 44卷 2期
