目的：探讨组织蛋白酶 D 绿色荧光蛋白复合质粒（GFP-CatD）技术在成纤维细胞慢性光损伤研究中的作用。方法长波紫外线（UVA）25 J/cm2每天照射人皮肤成纤维细胞1次，共21 d，构建慢性光损伤成纤维细胞模型。构建 GFP-CatD 质粒，将其转染入慢性光损伤成纤维细胞，荧光显微镜观察绿色荧光标记的组织蛋白酶 D 表达，Western 印迹检测组织蛋白酶 D 表达，流式细胞仪检测转染 GFP-CatD 后的慢性光损伤成纤维细胞凋亡率，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖率。结果慢性光损伤成纤维细胞转染 GFP-CatD 质粒96 h，可见绿色荧光蛋白组织蛋白酶 D 在慢性光损伤细胞胞质内表达。Western 印迹结果显示，慢性光损伤成纤维细胞转染 GFP-CatD 质粒后，组织蛋白酶 D 蛋白表达为未转染细胞的1.28倍。细胞凋亡检测结果发现，转染后的光老化成纤维细胞凋亡细胞率为4.29％±1.30％，与无转染的空白对照组凋亡细胞率3.03％±1.70％比较，差异无统计学意义（P >0.05）。MTT 细胞增殖检测结果发现，转染后的光老化成纤维细胞的细胞增殖率为45.20％±4.70％，无转染质粒的光老化成纤维细胞为43.60％±3.90％（P >0.05）。结论 GFP-CatD 复合质粒转染慢性光损伤成纤维细胞可示踪到组织蛋白酶 D 荧光蛋白，且不影响慢性光损伤成纤维细
作者：郑跃；陈海燕；许庆芳；叶聪秀；刘惠娴；易金玲；赖维
来源：中华皮肤科杂志 2015 年 12期
