目的 构建针对沙眼衣原体的活性噬菌体,并评估其对沙眼衣原体的作用.方法 将衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白VP1的IN5序列与M13噬菌体重组,获得重组M13-IN5噬菌体.利用PCR扩增、酶切、测序重组噬菌体基因,验证目的片段是否成功插入;通过噬菌斑形成实验检测重组噬菌体的活性.利用CCK8法检测效价为1011噬斑形成单位(PFU)/ml的M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体对Hela细胞增殖的影响,同时设置空白对照组(未感染衣原体的Hela细胞).Western印迹检测重组噬菌体、M13噬菌体、对数期大肠杆菌ER2738中IN5环蛋白的表达.在沙眼衣原体E型标准株的培养过程中,分别加入效价为1011PFU/ml的M13噬菌体、M13-IN5重组噬菌体进行干预,并设置衣原体对照组.感染后36 h,共聚焦显微镜下观察M13噬菌体和M13-IN5重组噬菌体定位情况;在感染后36、48、60、72 h碘染色观察计数包涵体.两样本均数间比较用t检验;多组样本均数间比较采用方差分析,两两比较采用Bonferroni检验.结果 成功构建含有IN5环基因的具有生物活性的重组M13噬菌体,Western印迹证实重组噬菌体表达IN5环/pⅢ融合蛋白,重组噬菌体效价达3.05×1011 PFU/ml.CCK8法检测显示,空白对照组、M13噬菌体组、M13-IN5噬菌体组A450值分别为3.63±0.01、3.55±0.02、3.70±0.01,组间差异无统

作者：练婷婷；魏世娟；刘原君；任杰；王生；郭媛丽；郭睿；刘全忠；邵丽丽

来源：中华皮肤科杂志 2018 年 51卷 12期