目的 建立一种重复性好、操作简便的成人肾脏足细胞原代培养方法.方法 取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织,分离出肾皮质,剪碎研磨并通过差异过筛法分别通过80目(孔径220 μm)、40目(450μm)、120目(125μm)细胞筛网,收集120目筛网上肾小球利用植块法进行接种,将接种培养面向上放置,4h后添加培养液并将培养瓶翻转过来正常放置培养箱内孵育.采用形态学观察和细胞间接免疫荧光染色法,对去氧肾上腺素、第八因子(F8)蛋白、波形蛋白、角蛋白和肾母细胞瘤蛋白(WT-1)进行鉴定；并用流式细胞仪分析足细胞纯度.结果 接种3d后可见绝大部分肾小球贴壁；5 d后几乎全部肾小球贴壁,少许肾小球周围有细胞爬出,体积中等,呈多边形,无突起伸出；7 ～ 10 d可见所有肾小球周围大量多边形细胞爬出,细胞迅速生长至融合状态,呈铺路石样外观,符合去分化状态足细胞特征；此时胰蛋白酶差异消化去除成纤维细胞传代培养.消化传代后的足细胞胞体、胞核逐渐增大,自细胞体伸出明显树枝状突起,常见双核,符合分化状态足细胞特征.免疫荧光染色发现传代7d后细胞表达足细胞特异性蛋白WT-1、去氧肾上腺素,不表达F8蛋白、波形蛋白、角蛋白,排除内皮细胞、系膜细胞和壁层上皮细胞污染.流式细胞仪分析足细胞纯度为98.3％.结论 应用差
作者：张伟伟；秦贵军；赵亚兵
来源：中华糖尿病杂志 2013 年 5卷 3期
