目的研究联合应用重组人骨保护素(rhOPG-Fc)和阿伦膦酸钠(ALN)对破骨细胞抑制作用.方法进行人类OPG-Fc融合蛋白毕赤酵母表达株的构建和鉴定.酶消化法获取新生小鼠颅骨成骨细胞,与破骨细胞前体细胞RAW264.7按照4∶1比例混合,培养于96孔板中.9 d后,重酒石酸盐抗酸性磷酸酶染色(TRAP染色)鉴定后,分别使用10-5 g/L rhOPG-Fc、10 μmol/L ALN、10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN、5×10-6 g/L rhOPG-Fc +5 μmol/L ALN作用于混合细胞体系,并设空白对照.加药后3、7 d观察破骨细胞数目和形态,计算单位面积内TARP阳性细胞个数,并行骨磨片吸收陷窝计数.结果重组人骨保护素(rhOPG-Fc)分子量与预期结果相符合,蛋白印迹检测(Western blotting)显示,该条带可被抗免疫球蛋白IgG抗体别显色.小鼠成骨细胞与破骨细胞前体细胞RAW264.7混合培养后9 d,体系中出现大量多核成熟破骨细胞,TARP染色证实为成熟破骨细胞.加药3、7 d后,与对照组相比,其余各组破骨细胞TARP阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数均明显减少,以10-5 g/L rhOPG-Fc+10 μmol/L ALN组减少最为显著.结论重组人骨保护素(rhOPG-Fc)可以有效减少成熟破骨细胞数目并抑制其功能.联合应用rhOPG-Fc和阿伦膦酸钠可以交互抑制成熟破骨细胞功能.
作者：黄鹏；王岩；迟志永；杨子义；倪健；杨武剑；王冉东；白金柱
来源：中华外科杂志 2005 年 43卷 12期
