目的观察缄默PLK1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对K562细胞内PLK1表达和细胞凋亡的影响,探讨PLK1在白血病发病中的作用,寻找更为有效的白血病治疗途径.方法设计合成针对PLK1基因1416～1436位点的shRNA片段,并将其克隆于绿色荧光蛋白的表达载体pEGFP-H1中,命名为pEGFP-H1/PLK1.通过电穿孔转染法将其导入K562细胞中,分为对照组、pEGFP-H1空载体转染组和pEGFP-H1/PLK1 shRNA重组质粒转染组,转染后24,48 h,分别通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因和蛋白水平的变化,以MTT方法测各组细胞的增殖活性,比色法检测各组细胞的半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白酶活性,并通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和G2/M期转变情况.结果PLK1 mRNA相对水平(与内参的灰度比值):对照组为1.25±0.07,空载体转染24,48 h组分别为1.21±0.08和1.23±0.09,shRNA重组质粒转染24,48 h组分别为0.52±0.04和0.25±0.02,shRNA重组质粒转染组较其他两组明显降低(P＜0.01).各组细胞PLK1的蛋白水平变化趋势与PLK1 mRNA表达相似.相应地,对照组、空载体转染48 h组、shRNA重组质粒转染24,48 h组的凋亡率分别为(8.3±0.6)
作者：张敏；陈智超；刘芳；游泳；刘仲萍；邹萍
来源：中华血液学杂志 2005 年 26卷 12期
