目的 构建多药耐药基因(mdr1)启动子控制的胸苷激酶-胞嘧啶脱氨酶(CD-TK)双自杀基因真核表达载体,研究其对耐药白血病细胞K562/A02的靶向杀伤作用.方法 利用分子克隆技术构建pcDNA3-mdr1P-CD-TK真核表达载体,脂质体介导法转染K562、K562/A02细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株.用PCR、RT-PCR鉴定TK、CD基因的稳定转染与表达,加用不同浓度的丙氧鸟苷(GCV)、5-氟胞嘧啶(5-FC)培养4 d,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 成功构建了mdr1启动子控制的CD-TK双自杀基因真核表达载体,脂质体成功转染细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞株.PCR结果显示,CD、TK基因均稳定存在于K562、K562/A02细胞中,RT-PCR结果显示K562/A02-CD-TK细胞有CD、TK基因特异性条带表达,而K562-CD-TK细胞无特异性条带.加入GCV、5-FC后,与K562-CD-TK细胞相比,K562/A02-CD-TK细胞存活率明显降低(在60μg/ml GCV和600μg/ml 5-FC联合作用后两种细胞存活率分别为85.04
作者：王向玲；纪春岩；马道新；赵建强；侯明；余海青；臧绍蕾
来源：中华血液学杂志 2006 年 27卷 11期
