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目的 观察G蛋白偶联受体91(GPR91)对早期糖尿病大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及可能的作用机制.方法 构建GPR91小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体pGCSIL-GFP-shGPR91及相应的慢病毒空载体pGCSIL-GFP-shScrambled.健康雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为对照组(A组)、糖尿病链脲佐菌素(STZ)组(B组)、空病毒LV.shScrambled组(C组)、病毒LV.shGPR91组(D组),每组均为15只大鼠.大鼠STZ腹腔注射2周后,C组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的空载体病毒1μl;D组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的pGCSIL-GFP-shGPR91慢病毒1 μl.注射后12周,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜中GPR91及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达和激活情况.苏木精-伊红染色和伊凡思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠视网膜微血管结构改变和渗漏情况.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)表达情况.结果 免疫组织化学染色可见GPR91主要表达于大鼠视网膜神经节细胞层;Western blot检测结果显示,D组GPR91表达较C组显著降低,差异有统计学意义(F=39.31,P<0.01).光学显微镜观察发现,B、C组大鼠视网膜内层毛细血管较A组大鼠视网膜内层毛细血管明显扩张,D组大鼠视网膜内层扩张的毛细血管显著改善.EB渗

作者:胡健艳;李婷婷;吴强

来源:中华眼底病杂志 2015 年 31卷 2期

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作者:
胡健艳;李婷婷;吴强
来源:
中华眼底病杂志 2015 年 31卷 2期
标签:
糖尿病视网膜病变/病理生理学 RNA,小分子干扰 受体,G-蛋白偶联 血管内皮生长因子类 p38丝裂原活化蛋白激酶类 动物实验 Diabetic retinopathy/physiopathology RNA,small interfering Receptors,G-protein-coupled Vascular endothelial growth factors p38 Mitogen-activated protein kinases Animal experimentation
目的 观察G蛋白偶联受体91(GPR91)对早期糖尿病大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及可能的作用机制.方法 构建GPR91小发夹RNA(shRNA)慢病毒载体pGCSIL-GFP-shGPR91及相应的慢病毒空载体pGCSIL-GFP-shScrambled.健康雄性Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为对照组(A组)、糖尿病链脲佐菌素(STZ)组(B组)、空病毒LV.shScrambled组(C组)、病毒LV.shGPR91组(D组),每组均为15只大鼠.大鼠STZ腹腔注射2周后,C组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的空载体病毒1μl;D组大鼠玻璃体腔注射浓度为1×108 TU/ml的pGCSIL-GFP-shGPR91慢病毒1 μl.注射后12周,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠视网膜中GPR91及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达和激活情况.苏木精-伊红染色和伊凡思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠视网膜微血管结构改变和渗漏情况.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)表达情况.结果 免疫组织化学染色可见GPR91主要表达于大鼠视网膜神经节细胞层;Western blot检测结果显示,D组GPR91表达较C组显著降低,差异有统计学意义(F=39.31,P<0.01).光学显微镜观察发现,B、C组大鼠视网膜内层毛细血管较A组大鼠视网膜内层毛细血管明显扩张,D组大鼠视网膜内层扩张的毛细血管显著改善.EB渗