目的：观察氧化应激下视网膜色素上皮细胞（RPE）外泌体对RPE细胞血管内皮生长因子（VEGF）-A及丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）表达的影响。方法培养人RPE（ARPE-19）细胞，细胞培养基中加入浓度为2.5μmol/L鱼藤酮诱导ARPE-19细胞发生氧化应激损伤。收集上清液，采取梯度超速离心法分离纯化外泌体。应用透射电子显微镜观察外泌体形态；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测ARPE-19细胞外泌体表面特异性标志蛋白CD63的表达。将氧化应激下ARPE-19细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为实验组，等量正常RPE细胞外泌体与ARPE-19细胞共培养作为对照组。采用噻唑蓝比色法检测ARPE-19细胞的细胞活力，以酶联免疫检测仪测量波长570 nm处各孔的吸光度[A，旧称光密度（OD）]值表示；免疫荧光染色法和Western blot检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt蛋白表达；实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测ARPE-19细胞VEGF-A、Akt mRNA表达。结果透射电子显微镜观察发现，ARPE-19细胞外泌体呈圆形或椭圆形膜性小囊泡，直径50～150 nm。Western blot检测结果显示，ARPE-19细胞外泌体表面表达特异性标志蛋白CD63。噻唑蓝比色法结果显示，实验组、对照组ARPE-19细胞在波长570 nm处的 A 值分别为0.582±0.015、0.787±0.032。实验组ARPE-19细胞在
作者：张惟；杨婧；陈松；何广辉；马映雪；陈莉；姜鉴洪；宋建
来源：中华眼底病杂志 2017 年 33卷 1期
