目的 观察靶向大鼠沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的小干扰(si)RNA慢病毒载体对大鼠视网膜神经节细胞(RGC)中Sirt1表达的影响.方法 设计4条靶向大鼠Sirt1基因的siRNA靶点序列,构建靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒载体.采用菌落聚合酶链反应(PCR)和DNA测序鉴定阳性克隆.应用阳性重组质粒与包装质粒共转染293T细胞,进行慢病毒包装及病毒滴度测定.将RGC分为空白对照组、转染阴性对照病毒载体组(NC组)以及分别转染4个带有干扰序列的si-Sirt1-1组、si-Sirt1-2组、si-Sirt1-3组、si-Sirt1-4组.采用荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组RGC中Sirt1 mRNA、蛋白相对表达量.结果 菌落PCR鉴定和DNA测序结果显示,靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒载体构建成功.在293T细胞中成功包装后,其病毒滴度为8×108 TU/ml.荧光定量PCR和Western blot检测结果显示,与NC组比较,si-Sirt1-1组、si-Sirt1-2组、si-Sirt1-3组、si-Sirt1-4组RGC中Sirt1 mRNA、蛋白相对表达量均明显下降,差异有统计学意义(F=27.682、1185.206,P=0.000、0.000);其中,以si-Sirt1-2组Sirt1 mRNA、蛋白相对表达量下降幅度最为明显.结论 靶向大鼠Sirt1基因的siRNA慢病毒载体可降低大鼠RGC中sirt1 mRNA、蛋白表达.

作者：摆茹；周月；芦晓红；蔡金金；姚青

来源：中华眼底病杂志 2017 年 33卷 5期