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目的了解体外培养牛眼小梁细胞是否表达胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ, IGF-Ⅰ).方法体外培养新生牛眼小梁细胞并传3代.采用Trizol试剂盒一步法提取细胞RNA,应用高度特异性寡核苷酸引物对IGF-Ⅰ的mRNA进行逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测, 并对扩增产物进行DNA双链测序鉴定.应用免疫组化Supervision染色法检测IGF-Ⅰ蛋白的表达.结果体外培养细胞符合牛眼小梁细胞的特点.RT-PCR扩增得到单一的产物,其序列与已知序列完全一致.IGF-Ⅰ免疫组化染色阳性.结论小梁细胞自身产生IGF-Ⅰ,IGF-Ⅰ的异常变化可能与原发性开角型青光眼的发病有关.

作者:曹阳;董继华;魏厚仁

来源:中华眼科杂志 2002 年 38卷 5期

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作者:
曹阳;董继华;魏厚仁
来源:
中华眼科杂志 2002 年 38卷 5期
标签:
小梁网 细胞培养 胰岛素样生长因子Ⅰ 逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学
目的了解体外培养牛眼小梁细胞是否表达胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ, IGF-Ⅰ).方法体外培养新生牛眼小梁细胞并传3代.采用Trizol试剂盒一步法提取细胞RNA,应用高度特异性寡核苷酸引物对IGF-Ⅰ的mRNA进行逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测, 并对扩增产物进行DNA双链测序鉴定.应用免疫组化Supervision染色法检测IGF-Ⅰ蛋白的表达.结果体外培养细胞符合牛眼小梁细胞的特点.RT-PCR扩增得到单一的产物,其序列与已知序列完全一致.IGF-Ⅰ免疫组化染色阳性.结论小梁细胞自身产生IGF-Ⅰ,IGF-Ⅰ的异常变化可能与原发性开角型青光眼的发病有关.