目的 探讨人脐带间充质干细胞(HUMSC)外泌体对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖、凋亡及迁移生物学特性的影响.方法 实验研究.组织块贴壁培养法原代培养HUMSC,扩增传代至第4代,流式细胞仪鉴定其细胞表面标志物;收集培养第4代HUMSC无血清培养基,分离提取外泌体,在电镜下观察其超微结构并用免疫印迹法鉴定其CD63、CD9蛋白表达;体外培养RPE细胞用噻唑蓝(MTT)法检测缺氧0、1、2、3、4、5d的细胞增殖情况;用细胞划痕实验检测缺氧0、24、48、72 h的细胞迁移情况,并结合细胞凋亡实验确定缺氧时间.处于生长旺盛期的RPE细胞分为5个组,分别为对照组、缺氧组及不同剂量外泌体预处理组(100、200、300 μg/ml),培育48 h后采用MTT法观察各组细胞的增殖能力,Annexin V/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术观察细胞凋亡,细胞划痕实验中观察各组细胞的迁移功能.结果 流式细胞仪检测第4代HUMSC的表面标志CD105、CD73、CD90呈强阳性表达,体外诱导成脂和成骨细胞,提示分离培养的HUMSC具有MSC特异性表型.分离的外泌体经扫描电镜观察可见大小不一的球状膜性结构,且免疫印迹法结果提示CD63、CD9呈阳性表达.体外培养RPE在缺氧0、1、2、3、4、5d用MTT法检测细胞增殖结果:与对照组比较,吸光度(A)值差异均有统计学意义,前2d随缺氧
作者：徐宁达；黄旅珍；朱莉；唐辛；李岩；赵明威
来源：中华眼科杂志 2019 年 55卷 12期
