目的探讨HBV DNA复制和表达的跨种属特异性,为HBV DNA转染跨种属原代肝细胞模型的建立提供实践基础和理论依据.方法分离培养原代鸭肝细胞(PDH),电转线性HBV DNA(转染组,1.19×1012拷贝/1×107PDH)或急性感染DHBV(感染组,4×108病毒颗粒/1×107PDH),分别于转染/感染后l d、3 d、5 d等时点检测PDH培养上清或裂解液中HBsAg、HBeAg与DHBsAg(采用IMX系统或ELISA检测);并采用Dot Blotting检测PDH裂解液中总HBV DNA.于转染/感染后2 d提取PDH总DNA采用Southem Blotting分析HBV DNA与DHBV复制型式.以单纯电击或未感染的PDH为对照组.结果转染后1 d、3 d和5 d各时点转染组PDH裂解液中HBsAg分别为15.24、14.55和5.13(P/N值,阳性≥2.1),HBeAg均为阴性;PDH培养上清中HBsAg与HBeAg均阴性;感染组各时点PDH上清中DHBsAg分别为14.6、31.53、34.73(S/N值,阳性≥2.1);上述各项指标于对照组均为阴性.Dot Blotting显示转染组与感染组PDH各时点的裂解液中HBV DNA与DHBV DNA均为阳性,对照组为阴性;Southern Blot分析显示:转染组HBV DNA与感染组DHBV均为游离复制型,可见4.0kb以下分子涂抹带,包括rcDNA、cccDNA(scDNA)和ssDNA等复制中间体;未见整合型HBV DNA-高分子区(4～24kg)涂抹带.结论HBVDNA在PDH中的复制和表达与DHBV感染组相

作者：姚云清；唐霓；黄爱龙；王波；张定凤

来源：中华医学杂志 2001 年 81卷 19期