目的 构建人乳头瘤病毒(HPV)18型E6/E7反义荧光真核表达载体,研究其对宫颈癌HeLa细胞增殖凋亡的影响.方法 以PCR法扩增HPV18型E6/E7区716bp片段并反向克隆到荧光真核表达载体pEGFP-C1,构建重组体pEGFP-HPV18E6E7as(EGFP-18AS)并转染人宫颈癌HeLa细胞.利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹技术检测转染后E6、E7基因在mRNA和蛋白水平的变化;用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测转染后细胞的的增殖活性;用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡率;荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学改变.结果 转染EGFP-18AS重组体后,HeLa细胞中E6、E7基因的mRNA表达和蛋白合成均明显下调;细胞增殖受到抑制;流式显示细胞G1期明显阻滞;同时在荧光显微镜下经Hoechst染色凋亡细胞出现染色质凝集、边集、碎裂等形态学改变.结论 重组质粒pEGFP-HPV18E6E7as能有效地抑制人宫颈癌HeLa细胞的生长和增殖,诱导其凋亡,证明了反义RNA技术的有效性,为宫颈癌的基因治疗提供了一种新的可能的途径.
作者：司马妮；孔德波；王薇；卢运萍；王世宣；马丁
来源：中华医学杂志 2007 年 87卷 23期
