目的 观察人血管内皮生长因子(VEGF)转染后的人脂肪组织来源干细胞(ADSCs)对VEGF蛋白的分泌和表达情况及转染后细胞的成骨活性变化.方法 胶原酶消化脂肪获取人ADSCs,经鉴定后进行培养传代.采用Trizol法获取编码人VEGF成熟肽的基因序列,将获得的目的基因VEGF与含绿色荧光蛋白的双顺反子表达载体连接成重组质粒pSELECT-GFP zeo-VEGF,分别转染第2、3、4、5代ADSCs.荧光显微镜下验证转染结果,酶联免疫(ELISA)检测转染后细胞的VEGF分泌.对第2代转染后的ADSCs于成骨条件下培养,检测上清液中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙蛋白(OC)的分泌.结果 脂质体介导的VEGF目的基因片段能够成功转染至体外培养的ADSCs;经ELISA定量检测,上清液中VEGF mRNA表达水平在转染组显著增高,对照组无明显变化.成骨条件培养下于转染后第3、5、7天ELISA检测人VEGF转染组对ALP (29.2±2.4)、(38.0±2.3)、(46.7±2.4) U/L(金氏单位)和OC的分泌量(13.2±1.6)、(18.3±1.6)、(25.3±1.5) μg/L以及实时聚合酶链反应(PCR)检测对ALP(0.1±0.0)、(0.2±0.0)、(0.3±0.0)和OC的分泌量(0.042 ±0.004)、(0.071±0.008)、(0.127±0.011)均明显高于空载体转染组及空白细胞组(P＜0.01).免疫印迹法检测人VEGF转染组中ALP/GAPDH和OC/GAPDH灰度比值明显高于空

作者：刘兆杰；胡永成；张银光；贾健

来源：中华医学杂志 2013 年 93卷 23期