目的 研究核心结合因子α-1(Cbfα-1)基因沉默对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响.方法 体外原代培养大鼠VSMC.针对大鼠Cbfα-1基因设计合成4对候选小分子干扰RNA(siRNA)序列,以Lipo 2000为载体,转染体外培养的VSMC;FAM荧光标记siRNA优化转染条件.反转录(RT)-PCR检测Cbfα-1 mRNA表达,筛选有效siRNA序列.将有效siRNA序列转染VSMC,细胞分为4组:(1)正常磷组(1.3 mmol/L);(2)高磷组(2.6 mmol/L);(3)siRNA转染组:高磷+Cbfα-1-siRNA;(4)阴性转染对照组:高磷+阴性对照siRNA.RT-PCR和Western印迹法检测Cbfα-1、骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白表达;茜素红染色观察细胞钙盐沉积.结果 在Cbfα-1-siRNA浓度为100nmol/L、Lipo为8μl/孔转染条件下,转染效率约55％;筛选最佳干扰序列Cbfα-1 siRNA1952,转染24 h沉默效率可达81.8％.与高磷组相比,siRNA转染组Cbfα-1 mRNA表达在转染后24和48 h均明显低于高磷组(24 h:0.335 ±0.059比0.714 ±0.106,48 h:0.574 ±0.036比0.726±0.086,均P＜0.01);Cbfα-1蛋白表达在转染后48和72 h均显著低于高磷组(均P＜0.01),以48 h最明显.siRNA有效沉默Cbfα-1基因表达后,siRNA转染组OPN mRNA和蛋白的表达明显低于高磷组(均P＜0.05),且细胞钙盐沉积亦明显低于高磷组.结

作者：余毅；魏培丹

来源：中华医学杂志 2014 年 94卷 4期