目的 研究叉头转录因子O1(FoxO1)过表达对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞(MCs)细胞外基质(ECM)蛋白分泌的影响及其作用机制.方法 以含组成性激活突变型(CA)FoxO1编码序列的慢病毒载体(LV-CA-FoxO1)及空慢病毒载体(LV-NC-GFP)转染MCs.实验分4组:正常糖(5.6 mmol/L)组(NG组),高糖(25 mmol/L)组(HG组)、高糖+LV-CA-FoxO1组(LV-CA组)、高糖+空病毒载体组(LV-NC组).各组培养72 h后,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测FoxO1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、转化生长因子β1(TGF-β1)和TGF-β Ⅰ型及Ⅱ型受体(TGF-βR Ⅰ/Ⅱ)mRNA的表达水平;Western印迹法检测FoxO1、磷酸化FoxO1(p-FoxO1)、TGF-β1、TGF-βRⅠ/Ⅱ的蛋白表达;细胞免疫荧光化学检测TGF-βR Ⅰ在细胞内表达分布.结果 (1) FoxO1表达及活性改变:HG组FoxO1 mRNA及蛋白表达与NG组相比差异均无统计学意义(均P ＞0.05),p-FoxO1蛋白表达高于NG组(P＜0.05);与HG组相比,LV-CA组FoxO1mRNA与蛋白表达水平均高于HG组(mRNA:为17.36±1.13比1.01 ±0.12,蛋白:4.38±0.09比0.93 ±0.10,均P＜0.05),p-FoxO1/FoxO1低于HG组(P＜0.05),FoxO1表达增加,转录活性增强.(2) ECM蛋白分泌改变:HG组FN、Col Ⅰ及ColⅣmRNA表达高于NG组(均P＜0.05),L

作者：郭丰；王庆祝；秦贵军；周英旎；吴丽娜；刘飞

来源：中华医学杂志 2014 年 94卷 24期