目的 构建靶向EZH2基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达载体,探讨抑制EZH2基因表达对结直肠癌细胞增殖的影响.方法 根据EZH2 cDNA序列设计具有短发夹结构的DNA序列,构建重组表达载体,鉴定后转染至SW480细胞.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测EZH2基因的抑制效果,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测EZH2抑制对SW480细胞增殖的影响.结果 EZH2基因shRNA表达质粒转染48 h后,基因沉默组和阴性对照组细胞中EZH2mRNA的相对表达水平分别为0.339±0.013和1.968±0.072,EZH2蛋白的相对表达水平分别为0.229±0.008和1.168 ±0.053,基因沉默组均明显低于阴性对照组(P＜0.01,P＜0.05).转染后48、72 h,细胞生长抑制率分别为30.7％和25.9％,与空白对照组比较细胞生长受到明显抑制(P＜0.05).结论 靶向EZH2基因的shRNA重组表达载体构建成功,并能显著抑制EZH2基因的表达.沉默EZH2基因能明显抑制结直肠癌细胞的增殖.
作者：王建新；吕艳锋；韩冰冰
来源：中华肿瘤杂志 2012 年 34卷 10期
